25羟基维生素D可以通过液相色谱-串联质谱法、酶联免疫法、高效液相色谱法、化学发光法等方法进行检查，具体如下：

　　1、液相色谱-串联质谱法

　　液相色谱-串联质谱法是用液相色谱-串联质谱仪进行检测的方法，样品经处理后采用液相色谱分离，在多反应监测扫描模式下，可同时检测25(OH)D2和25(OH)D3，此检测方法具有高度灵敏性和准确性，是25羟基维生素D检查的“金标准”。

　　2、酶联免疫法

　　酶联免疫法是使血清中的抗原或抗体与酶复合物结合，通过显色检测，经过孵育、洗板、加底物等工序来定量测定人血清或血浆中25(OH)D水平及其他羟基化代谢产物。

　　3、高效液相色谱法

　　高效液相色谱法是利用不同物质在不同状态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离效果的分离和分析，可反映人体的维生素D的水平，是评估维生素D的重要指标。

　　4、化学发光法

　　化学发光法是利用化学发光来测定化学发光反应和偶合反应中的催化剂、增敏剂、反应物，该方法能够检测出血清25(OH)D浓度，并根据测定结果对人体维生素D的营养状况作出评价。